浅析空白样品吸光度偏高的解决方法

在测量过程中，很多实验人员经常会遇到空白吸光度偏高这一现象，在确认实验用水、试剂、器皿、高压灭菌器等没有问题的情况下，本文着重探讨紫外可见分光光度计的误差及调节。

空白样品吸光度检测

我们选用同一个空白溶液和同一套石英比色皿，在三个不同实验室中的三个不同品牌的紫外分光光度计上检测。空白吸光度值差异较大，分别为0.260、0.044和0.299。这既与仪器本身光学系统的差异及使用时间的长短有关.也与实验人员对仪器状态的调节有关。

原因分析

由于目前实验室使用的分光光度计大多是双光束的，因此，通常我们在做单个固定波长的吸光度测定时，是在某个选定的波长下，先将两个比色皿都装上纯水后点击Zero调零.这样做可以抵消两个比色皿的差异。但在总氮的测定方法中，是对两个波长下吸光度的同时测定。这样，当我们用Zero调零时，实际上只是对单个波长(275nm)调零。而没有同时在220nm下调零，因此若此时仪器本身的基线发生漂移，就会使220nm下的吸光度漂移，从而给实验带来系统误差。我们将两个比色皿装上纯水后点击Zero调零，然后直接点击Measure测量，结果证实了我们的猜测：A220=0.213，A275=0.003(理论上A220也应在0.000左右)。

解决方法

当分光光度计光源使用了一定时间后，光强会出现一定的衰减，而此时若仍然使用一段时间以前的基线作基准，样品池的吸收值就会相对增高，带来正误差。我们将两个比色皿装上纯水后，在操作界面上选择200～300nm进行基线扫描，并将它作为当前的用户基线，就可抵消吸光度的偏离了。通过这种方法校正后，进行了一个空白实验，吸光度为：A220=0.022，A275=0.000，Ab=0.022。结果令人满意。由此可见，定期对光度计的基线进行更新，可有效地校正实验误差。

在测定过程中，经常会遇到空白实验的吸光度较高的现象，我们可以通过进行多个空白实验的对比，找到产生偏离的原因并及时校正，减少实验的误差，保证实验结果的稳定性和准确性。