比耳定律概述及其使用局限性

分光光度计的理论基础是比耳定律，比耳定律问世已240多年了，几乎所有的光学分析仪器如: 紫外分光光度计、可见分光光度计、原子吸收分光光度计、液相色谱仪的紫外检测器等的原理都是采用比耳定律。

比耳定律可以描述为：当一束平行的单色光通过某一均匀的有色溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和光程的乘积成正比，它可用以下数学公式描述：A=kbc，k为物质的吸光常熟，b为物质的厚度，c为物质的浓度。这就是比耳定律的真正物理意义。它是光度分析中定量分析的最基础、最根本的依据，也是紫外可见分光光度计的基本原理。

比耳定律局限性

紫外可见分光光度计分析的基本原理是比耳定律，比耳定律所描述的物质对光的吸光度A、光程b和物质的浓度C成线性关系。但是，这只是在低含量时才能成立，因此，比耳定律A=kbC是一个有限使用的定律。因为在高浓度一般指＞0.01mol/L时，吸收成分之间的平均距离将缩小到一定程度，邻近质点彼此的电荷分布都会相互受到影响，将改变它们对特定辐射的吸收能力，这种影响的程度取决于物质的浓度，它可使吸光度与浓度之间的线性关系发生偏离。

吸光度与浓度之间线性关系的偏离还与溶液的折射率n有关；因为，摩尔吸光系数k是真实摩尔吸光系数和溶液的折射率的函数，而溶液的折射率是随着溶液浓度的改变而改变的，所以k也随浓度改变。然而，实际上当浓度≤0.01mol/L时，折射率基本上是不变的；但当浓度＞0.01mol/l时，K将随浓度而改变。

因此，比耳定律在低浓度时是正确的，但不排除在高浓度时，采用差示分光光度法、多波长法等适当方式进行定量分析。