分光光度法测定苦瓜中维生素C的含量

 

苦瓜味甘，性平，有解毒排毒、养颜美容的功效，含有另增白皮肤的维生素C，本文将着重阐述用分光光度法快速准确的测定维生素C含量的步骤。

第一步： 准备主要仪器和试剂

• 100ug/ml的维生素C标准溶液： 在分析天平上准确称取维生素C l0mg，加2mL 10％HCl，混匀，加入新煮沸并冷却的二次蒸馏水定容至l00ml。棕色容量瓶中，摇匀，备用；l0ug/mLVc标准液： 稀释100ug/mL维生素C标准溶液，现用现配。
• 纯度99.97％的维生素C，盐酸为分析纯，实验用水为二次蒸馏水
• 黄瓜汁：将苦瓜洗净削皮，用滤纸吸干表面的水，用电子天平准确称取10g，用榨汁器将苦瓜榨汁，并过滤得样品汁液，将滤液移人100mL棕色容量瓶中，加2mL 10％HCL，混匀，加入新煮沸并冷却的蒸馏水定容，摇匀，若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过台式高速离心机16000r/mln离心过滤，消除浑浊现象，作为储备液备用。

• 双光束紫外可见分光光度计
• 北京赛多利斯仪器厂生产的BS224S电子分析天平
• ZRD干燥箱
• 安徽千玻仪器厂的微型砂芯漏斗

第二步： 吸收曲线的绘制

用吸量管吸取0.0ml和1.0ml维生素C标准溶液分别移人50ml容量瓶中，加入l％HCL稀释至刻度，摇匀，用1cm石英比色皿，以试剂空白为参比溶液，在190～300nm之间，全程扫描吸光度，最大吸收波长为242.6nm，以此为测定波长。

第三步： 测试条件的确定

• 溶液PH值的选择： 配制好不同pH值盐酸溶液后，以不同pH值盐酸作为溶剂，配置维生素C的标准溶液，定容，摇匀。用1cm的石英比色皿测定不同pH值维生素C的吸光度，以蒸馏水为参比溶液，在选择的波长下测定溶液的吸光度，得不同pH值维生素C溶液的吸收曲线，从而得到最佳酸度的范围pH=1.5。
• 温度的选择： 在一个50ml容量瓶中，用吸量管加1mLVc标准溶液，再加入1％HCI稀释至刻度，摇匀。立刻用lcm比色皿，以二次蒸馏水为参比溶液，在242.6nm波长下测定吸光度。然后依次测定放置在10，20，30，40，50，60，70℃后的吸光度。将体系每隔2min于242.6nm波长处测定吸光度，反应温度及稳定性实验结果表明，90℃后吸光度值变小，说明温度较高时维生素C极易被氧化而失去活性，所以最佳温度应为30℃。
• 时间的选择： 在一个50ml容量瓶中，用吸量管加1mLVc标准溶液，再加入1％Hcl稀释至刻度，摇匀。立刻用1cm比色皿，以二次蒸馏水为参比溶液，在242.nnm波长下测定吸光度。然后依次放置0，5，10，20，30，40，50，60，70min，…2h后测定吸光度。反应时间及稳定性实验结果表明，1h内吸光度没有大的变化。

第四步： 制作标准曲线

10ug/mL维生素C标液： 用吸量管吸取10ml100ug/ml维生素C标液于100ml.容量瓶中，加入1％，HCL溶液稀释至刻度，摇匀。用吸量管分别吸取维生素季C标液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，到6个洁净的50mL容量瓶中，加入1％盐酸溶液，稀释至刻度，摇匀，以0.0ml维生素C标液为空白作参比，在242.6nm波长下，用lcm石英比色皿，用紫外光度计测定吸光度。将数据进行回归处理，结果表明维生素C在0--10mg/ml范围内呈线性关系，线性回归方程r=0.9997，检出限为0.023 ug/mL。

第五步： 苦瓜维生素C含量的测定

用吸量管吸取上述样品储备液1mL于50mL容量瓶中加人1％HCI稀释至刻度，摇匀，在紫外分光光度计上，以0.0mL Vc标液为空白进行参比，在242.6nm用1cm石英比色皿，测定样品吸光度A，平均含量为11.78mg/100g。

结论： 维生素C纯品为白色无臭结晶，本文用紫外分光光度法直接测定了普通蔬菜苦瓜中Vc的含量，其测定步骤简便、检测速度快、结果准确。