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紫外可见分光光度计在生命科学领域的应用

 

紫外可见分光光度计在生命科学中应用非常广泛,最主要的有①蛋白质分析②核酸分析③氨基酸分析④糖类分析⑤多糖分析5个方面。

1.蛋白质分析工作中的应用

紫外可见分光光度计在蛋白质的分析中,最主要的是作蛋白质含量检测;一般是在蛋白质的吸收峰上作吸光度测定。因为蛋白质对紫外光的主要吸收波长为280nm,所以,采用光度测量模式,将仪器的波长GOTO到蛋白质的最大吸收峰波长280nm上,测试其吸光度大小,就可完成对蛋白质的定量检测。

2.核酸分析工作中的应用

紫外可见分光光度计在核酸分析中的应用,主要是用来对核酸的定量检测;因为核酸的吸收峰在260nm。我们只要采用光度测量模式,将紫外可见分光光度计的波长GOTO到核酸的最大吸收峰260nm上,测试其吸光度大小就是了。

3.氨基酸分析工作中的应用

紫外可见分光光度计在氨基酸分析中的应用,主要是用来对氨基酸的定量检测。因为氨基酸对紫外光的主要吸收波长为230nm,所以,我们只要采用光度测量模式,将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO到氨基酸的最大吸收峰230nm上,就可测试其吸光度大小,从而计算出氨基酸的含量。

但是,因为氨基酸分析时,一般是将它溶解在水中,而水在230nm附近有很多干扰吸收线,所以,在用紫外可见分光光度计对氨基酸分析检测时,要注意防止干扰的问题。此外,还需注意:只有少数氨基酸有紫外吸收,多数氨基酸无紫外吸收或很弱,测定时要衍生化后再测。

4.糖类分析测试工作中的应用

紫外可见分光光度计在糖的分析中,主要是作定量检测。因为糖对紫外光的主要吸收波长为218nm,所以,对糖类进行分析时,只要采用光度测量模式,将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO到氨基酸的最大吸收峰218nm上,就可测试其吸光度大小,从而计算出糖的含量。

5.多糖分析测试工作中的应用

紫外可见分光光度计在多糖的分析中,主要也是作定量检测。因为多糖对紫外光的主要吸收波长为206nm,所以,我们只要采用光度测量模式,将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO到多糖的最大吸收峰206nm上,就可测试其吸光度大小,从而计算出多糖的含量。

但是多糖的分析难度很大。因为,在206nm处的时候,光源(氘灯)的能量已经很弱,仪器光学系统的能量输出也很低,光电倍增管的灵敏度也很低,206nm左右的干扰也很大。所以,用紫外可见分光光度计作多糖的分析是很难的事,目前许多科学家正在研究中。

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