CTAB SDS 高盐法提取葡萄DNA的比较

CTABSDS 高盐法是3种提取的葡萄总DNA的方法，在本试验中都可用来提取葡萄的DNA，本试验的目的是要在此3种方法中选择出一种步骤简单，经济、高效，并能得到高质量的葡萄幼叶基因组DNA的提取方法。

试材供料

本试验所需的葡萄品种为红地球，和田红，温宿红，红木纳格，白木纳格，马奶子，粉圆，长葡萄，黑葡萄。均采自新疆阿克苏地区，采集健康枝条上的新鲜嫩叶若干，放人自封袋，冰盒保存带回实验室，置于-84℃冰箱保存，以备提取葡萄基因组DNA。

试验方法

取出超低温冰箱保存的幼叶，迅速研磨至粉末状，分别采取以下方法提取总DNA。

• CTAB法：该方法参照汤文开的一种快速简单高效提取植物DNA的方法的鉴定进行提取。
• 高盐法：采用张立平的葡萄属植物染色体DNA的提取纯化及RFLP的鉴定进行提取。
• SDS法：参照卢扬江的DNA的一种简易方法的方法提取。

总DNA的定性定量检测

将提取的DNA样品做适当稀释后，用紫外可见分光光度计检测各样品在260nm波长和280nm波长下的吸光值。以1OD260相当于50ng/mL双链DNA为标准，计算DNA样品的浓度。根据公式计算DNA浓度、纯度。取4微升DNA原液，在1.0％的琼脂糖凝胶1×TAE缓冲液条件下电泳，做定性分析。检测DNA的浓度，纯度及DNA有无降解。同时进行RAPD—PCR扩增分析。

结论

SDS法；高盐法；CTAB法对葡萄品种的幼叶基冈组DNA进行提取，经电泳检测、紫外分光光度计吸收检测及RAPD分析发现，CTAB、SDS及高盐法三种DNA提取方法皆可用于葡萄DNA的提取。其中以改良的CTAB法提取的DNA产量最高。采用此法提取的基因组DNA呈无色透明状，说明该方法去除色素及次生代谢物效果好，提取总DNA的步骤简便，产率高无降解，所提取的DNA可直接用于RAPD—PCR的扩增，且扩增后条带清晰，重复性好。因此，改良的CTAB法是适合新疆葡萄幼叶基因组DNA提取的最佳方法。