柱子法和电泳法提取DNA的回收率比较

柱子法和电泳法均可以提取DNA，然而提取的回收率以及纯度有一定的差别，本文用紫外分光光度法对其回收率进行分析，旨在寻求更有效地提起DNA的方法。

DNA提起方法

• 柱式法: 粗DNA经1.5％(W/v)琼脂糖凝胶电泳，将主带用UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒回收，操作方法按说明书进行。
• 电泳法: 粗HDNA跑1.5％(W/v)琼脂糖凝胶电泳，待DNA主带进入到胶上预制的孔中时，用枪头小心的将有DNA的溶液吸入到离心管中，估计溶液的体积，加入1/10体积的醋酸钠(pH4.2)，用无水乙醇进行沉淀。

DNA的检测

将粗提DNA及回收纯化后的DNA跑1.0％的琼脂糖凝胶，EB染色，紫外灯下拍照检测DNA的完整性，并用9100紫外可见分光光度计检测浓度与纯度。

测量结果

两种方法提取的DNA回收率如下图所示。

• 利用紫外光度计对上述三种方法提取的粗DNA进行测定表明，柱子法和电泳法晌回收效率均低子25％，但总的来看柱子法回收效率较电泳法稍高。
• 用柱子法回收时，PVP法提取DNA回收效率最高，其次是Microwave法，再次是Zhou法。
• 用电泳法回收时，PVP法最高，其次是Zhou法，再次是Microwave法。

结果分析

将较大量的粗DNA进行回收时，回收柱有一定的量饱和度，当DNA总量超过柱子的最大能力，其回收效率必然降低，因此Zhou法的粗DNA量增大，故回收的效率亦最低；而电泳法回收则不存在这个问题。同时，柱子的回收效率远低于使用况明书上的80-90％的回收效率，其原因可能是粗DNA中内含物成分复杂，因而降低了DNA的纯化回收效率；另外一个原因，利用紫外分光光度计检测DNA浓度，其中包含断裂DNA，但用电泳回收的方法进行纯化时，这一部分自然不在回收之列，导致回收效率降低。